Analisis Forensik

Toksikologi

Analisis Forensik Sederhana

Oleh :

Nama : yulianti muhsin

Nim : Aks.1.11.024

AKADEMI ANALIS KESEHATAN

SANDI KARSA MAKASSAR

BAB I

PENDAHULUAN

1. Latar Belakang

Tingginya tingkat kriminalitas saat ini menyebabkan tingginya permintaan visum. Hal ini menjadi perhatian kita sebagai dokter umum karena walaupun permintaan visum biasanya diajukan kepada rumah sakit besar baik umum maupun swasta, tidak menutup kemungkinan permintaan visum diajukan kepada kita sebagai dokter umum pada saat kita melakukan tugas PTT di suatu daerah. Untuk itu sebagai dokter umum kita wajib dapat melakukan visum dan membuat laporannya melalui V et R.

Dalam setiap melakukan visum, perlu dilakukan pemeriksaan penunjang untuk memperjelas dan membuktikan kebenaran suatu kasus. Karena sebenarnya, pada setiap kejadian kejahatan hampir selalu ada barang bukti yang tertinggal, seperti yang dipergunakan oleh seorang ahli hukum kenamaan Italia yang bernama E. Ferri, 1859-1927, bahwa ada yang dinamakan ”saksi diam” yang terdiri antara lain atas :

1. Benda atau tubuh manusia yang telah mengalami kekerasan.

2. Senjata atau alat yang dipakai untuk melakukan kejahatan.

3. Jejak atau bekas yang ditinggalkan oleh si penjahat pada tempat kejadian.

4. Benda-benda yang terbawa oleh si penjahat baik yang berasal dari benda atau tubuh manusia yang mengalami kekerasan maupun yang berasal dari tempat kejadian.

5. Benda-benda yang tertinggal pada benda atau tubuh manusia yang mengalami kekerasan atau ditempat kejadian yang berasal dari alat atau senjata yang dipakai ataupun berasal dari si penjahat sendiri. ⁽¹⁰⁾

Bila ”saksi diam” tersebut diteliti dengan memanfaatkan berbagai macam ilmu forensik (forensic sciences) maka tidak mustahil kejahatan tersebut akan dapat terungkap dan bahkan korban yang sudah membusuk atau hangus serta pelakunya akan dapat dikenali. Sebagai contoh, pada kasus infantisida, untuk kepentingan pengadilan perlu diketahui apakah bayi tersebut lahir hidup kemudian meninggal karena pembunuhan atau memang lahir mati, dengan mudah dapat kita ketahui dengan melakukan pemeriksaan hidrostatik, dimana bila jaringan paru yang dicelupkan ke dalam air tawar tersebut mengapung maka bayi tersebut dilahirkan dalam keadaan hidup.

Oleh sebab itu, pemeriksaan penunjang khususnya pemeriksaan laboratorium sederhana menjadi sangat dibutuhkan keberadaannya. Dalam membantu kita sebagai si pembuat visum untuk memperjelas suatu kasus kejadian kejahatan, karena dengan mengetahui secara pasti pemeriksaan penunjang laboratorium sederhana apa saja yang dapat dilakukan dalam kasus-kasus tertentu, apa yang kita lakukan menjadi tepat guna. Sehingga dapat membantu terungkapnya kebenaran yang sesungguhnya akan suatu kasus kejadian kejahatan seperti moto yang berlaku dalam forensik bahwa ”melalui visum, barang/ benda yang tidak bernyawa dan tidak bergerak dapat dibuat berbicara oleh para dokter yang melakukan visum melalui V et R.”

B.     Perumusan Masalah

Berdasarkan latar belakang diatas maka didapatkan adanya perumusan masalah yaitu :

1. Apa saja pemeriksaan laboratorium sederhana?
2. Bagaimana cara melakukannya dan interpretasi hasilnya?
3. Bagaimana implementasinya pada kasus-kasus tertentu?

C.     Tujuan

Penyusunan refarat ini bertujuan agar tenaga medis khususnya para dokter umum yang diwajibkan untuk dapat melakukan visum dan membuat V et R, dapat mengetahui dan memahami macam-macam pemeriksaan laboratorium sederhana yang ada pada ilmu forensik dan dapat menentukan pemeriksaan laboratorium sederhana yang dapat dilakukan pada kasus tertentu untuk membantu mengetahui penyebab kematian.

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

1. Definisi Pemeriksaan Laboratorium Sederhana

Tidak ada literatur yang secara jelas membatasi kata ”sederhana” pada pemeriksaan laboratorium sederhana forensik ini, untuk itu kami membatasinya sendiri, yaitu pemeriksaan laboratorium yang dalam pengerjaannya mudah, dengan alat dan reagen yang murah dan mudah didapat namun memberi nilai manfaat yang besar.

1. Macam-macam Pemeriksaan Laboratorium Sederhana dan Pelaksanaannya

1. Pemeriksaan Laboratorium Forensik Darah

Pemeriksaan bercak darah merupakan salah satu pemeriksaan yang paling sering dilakukan pada laboratorium forensik. Karena darah mudah sekali tercecer pada hampir semua bentuk tindakan kekerasan, penyelidikan terhadap bercak darah ini sangat berguna untuk mengungkapkan suatu tindakan kriminil. ⁽¹⁾

Pemeriksaan darah pada forensik sebenarnya bertujuan untuk membantu identifikasi pemilik darah tersebut.

Sebelum dilakukan pemeriksaan darah yang lebih lengkap, terlebih dahulu kita harus dapat memastikan apakah bercak berwarna merah itu darah. Oleh sebab itu perlu dilakukan pemeriksaan guna menentukan :

a. Bercak tersebut benar darah

b. Darah dari manusia atau hewan

c. Golongan darahnya, bila darah tersebut benar dari manusia

Untuk menjawab pertanyaan – pertanyaan diatas, harus dilakukan pemeriksaan laboratorium sebagai berikut :

a. Persiapan

Bercak yang menempel pada suatu objek dapat dikerok kemudian direndam dalam larutan fisiologis, atau langsung direndam dengan larutan garam fisiologis bila menempel pada pakaian.

b. Pemeriksaan Penyaringan (presumptive test)

Ada banyak tes penyaring yang dapat dilakukan untuk membedakan apakah bercak tersebut berasal dari darah atau bukan, karena hanya yang hasilnya positif saja yang dilakukan pemeriksaan lebih lanjut.

Prinsip pemeriksaan penyaringan:

H₂O₂ ——> H₂O + O_n

Reagen —-> perubahan warna (teroksidasi)

Pemeriksaan penyaringan yang biasa dilakukan adalah dengan reaksi benzidine dan reaksi fenoftalin. Reagen dalam reaksi benzidine adalah larutan jenuh Kristal Benzidin dalam asetat glacial, sedangkan pada reaksi fenoftalin digunakan reagen yang dibuat dari Fenolftalein 2g + 100 ml NaOH 20% dan dipanaskan dengan biji – biji zinc sehingga terbentuk fenolftalein yang tidak berwarna. ⁽¹⁾

Hasil positif menyatakan bahwa bercak tersebut mungkin darah sehingga perlu dilakukan pemeriksaan lebih lanjut. Sedangkan hasil negative pada kedua reaksi tersebut memastikan bahwa bercak tersebut bukan darah. ⁽²⁾

1. Reaksi Benzidine (Test Adler) ^{(1), (2)}

Dulu Benzidine test pada forensic banyak dilakukan oleh Adlers (1904). Tes Benzidine atau Test Adler lebih sering digunakan dibandingkan dengan tes tunggal pada identifikasi darah lainnya. Karena merupakan pemeriksaan yang paling baik yang telah lama dilakukan. Pemeriksaan ini sederhana, sangat sensitif dan cukup bermakna. Jika ternyata hasilnya negatif maka dianggap tidak perlu untuk melakukan pemeriksaan lainnya.

Cara pemeriksaan reaksi Benzidin:

Sepotong kertas saring digosokkan pada bercak yang dicurigai kemudian diteteskan 1 tetes H₂0₂ 20% dan 1 tetes reagen Benzidin.

Hasil:

Hasil positif pada reaksi Benzidin adalah bila timbul warna biru gelap pada kertas saring.

2. Reaksi Phenolphtalein (Kastle – Meyer Test) ⁽¹⁾

Prosedur test identifikasi yang sekarang ini, mulai banyak menggunakan Phenolphtalein. Pada penelitian yang dilakukan oleh Kastle (1901,1906), zat ini menghasilkan warna merah jambu terang saat digunakan pada test identifikasi darah.

Cara Pemeriksaan reaksi Fenolftalein:

Sepotong kertas saring digosokkan pada bercak yang dicurigai langsung diteteskan reagen fenolftalein.

Hasil:

Hasil positif pada reaksi Fenoftalin adalah bila timbul warna merah muda pada kertas saring.

c. Pemeriksaan Meyakinkan/Test Konfirmasi Pada Darah ^{(1), (2)}

Setelah didapatkan hasil bahwa suatu bercak merah tersebut adalah darah maka dapat dilakukan pemeriksaan selanjutnya yaitu pemeriksaan meyakinkan darah berdasarkan terdapatnya pigmen atau kristal hematin (hemin) dan hemokhromogen.

Terdapat empat jenis pemeriksaan yang dapat dilakukan untuk memastikan bercak darah tersebut benar berasal dari manusia, yaitu :

1. Cara kimiawi

Terdapat dua macam tes yang dapat dilakukan untuk memastikan bahwa yang diperiksa itu bercak darah, atas dasar pembentukan kristal-kristal hemoglobin yang dapat dilihat dengan mata telanjang atau dengan mikroskopik. Tes tersebut antara lain tes Teichmann dan tes Takayama.

a. Test Teichman (Tes kristal haemin)

Pertama kali dilakukan oleh Teicmann (1853). Test diawali dengan memanaskan darah yang kering dengan asam asetat glacial dan chloride untuk membentuk derivate hematin. Kristal yang terbentuk kemudian diamati di bawah mikroskop, biasanya Kristal muncul dalam bentuk belah-belah ketupat dan berwarna coklat. ⁽¹⁾

Cara pemeriksaan:

Seujung jarum bercak kering diletakkan pada kaca obyek tambahkan 1 butir kristal NaCL dan 1 tetes asam asetat glacial, tutup dengan kaca penutup dan dipanaskan.

Hasil:

Hasil positif dinyatakan dengan tampaknya Kristal hemin HCL yang berbentuk batang berwarna coklat yang terlihat dengan mikroskopik. ⁽¹⁾

Kesulitan :

Mengontrol panas dari sampel karena pemanasan yang terlalu panas atau terlalu dingin dapat menyebabkan kerusakan pada sampel.

b. Test Takayama (Tes kristal B Hemokromogen)

Apabila heme sudah dipanaskan dengan seksama dengan menggunakan pyridine dibawah kondisi basa dengan tambahan sedikit gula seperti glukosa, Kristal pyridine ferroprotoporphyrin atau hemokromogen akan terbentuk. ⁽²⁾

Cara kerja:

Tempatkan sejumlah kecil sampel yang berasal dari bercak pada gelas objek dan biarkan reagen takayama mengalir dan bercampur dengan sampel. Setelah fase dipanaskan, lihat di bawah mikroskop.

Hasil :

Hasil positif dinyatakan dengan tampaknya kristal halus berwarna merah jambu yang terlihat dengan mikroskopik.

Kelebihan:

Test dapat dilakukan dan efektif dilakukan pada sampel atau bercak yang sudah lama dan juga dapat memunculkan noda darah yang menempel pada baju. Selain itu test ini juga memunculkan hasil positif pada sampel yang mempunyai hasil negative pada test Teichmann. ⁽¹⁾

Selain dua tes tersebut terdapat juga tes yang digunakan untuk memastikan bercak tersebut berasal dari darah, yaitu :

c. Pemeriksaan Wagenaar

Cara pemeriksaan:

Seujung jarum bercak kering diletakkan pada kaca obyek, letakkan juga sebutir pasir, lalu tutup dengan kaca penutup sehingga antara kaca obyek dan kaca penutup terdapat celah untuk penguapan zat. Kemudian pada satu sisi diteteskan aseton dan pada sisi lain di tetes kan HCL encer, kemudian dipanaskan.

Hasil:

Hasil positif bila terlihat Kristal aseton hemin berbentuk batang berwarna coklat. Hasil negative selain menyatakan bahwa bercak tersebut bukan bercak darah, juga dapat dijumpai pada pemeriksaan terhadap bercak darah yang struktur kimiawinya telah rusak, misalnya bercak darah yang sudah lama sekali, terbakar dan sebagainya.

2. Cara serologik

Pemeriksaan serologik berguna untuk menentukan spesies dan golongan darah. Untuk itu dibutuhkan antisera terhadap protein manusia (anti human globulin) serta terhadap protein hewan dan juga antisera terhadap golongan darah tertentu.

Prinsip pemeriksaan adalah suatu reaksi antara antigen (bercak darah) dengan antibody (antiserum) yang dapat merupakan reaksi presipitasi atau reaksi aglutinasi.

a. Test Presipitin Cincin ⁽²⁾

Test Presipitin Cincin menggunakan metode pemusingan sederhana antara dua cairan didalam tube. Dua cairan tersebut adalah antiserum dan ekstrak dari bercak darah yang diminta untuk diperiksa.

Cara pemeriksaan :

Antiserum ditempatkan pada tabung kecil dan sebagian kecil ekstrak bercak darah ditempatkan secara hati-hati pada bagian tepi antiserum. Biarkan pada temperatur ruang kurang lebih 1,5 jam. Pemisahan antara antigen dan antibody akan mulai berdifusi ke lapisan lain pada perbatasan kedua cairan. ⁽¹⁾

Hasil:

Akan terdapat lapisan tipis endapan atau precipitate pada bagian antara dua larutan. Pada kasus bercak darah yang bukan dari manusia maka tidak akan muncul reaksi apapun.

b. Reaksi presipitasi dalam agar. ^{(1), (2)}

Cara pemeriksaan :

Gelas obyek dibersihkan dengan spiritus sampai bebas lemak, dilapisi dengan selapis tipis agar buffer. Setelah agak mengeras, dibuat lubang pada agar dengan diameter kurang lebih 2 mm, yang dikelilingi oleh lubang-lubang sejenis. Masukkan serum anti-globulin manusia ke lubang di tengah dan ekstrak darah dengan berbagai derajat pengenceran di lubang-lubang sekitarnya. Letakkan gelas obyek ini dalam ruang lembab (moist chamber) pada temperature ruang selama satu malam.

Hasil :

Hasil positif memberikan presipitum jernih pada perbatasan lubang tengah dan lubang tepi.

Pembuatan agar buffer :

1 gram agar; 50 ml larutan buffer Veronal pH 8.6; 50 ml aqua dest; 100 mg. Sodium Azide. Kesemuanya dimasukkan ke dalam labu Erlenmeyer, tempatkan dalam penangas air mendidih sampai terbentuk agar cair. Larutan ini disimpan dalam lemari es, yang bila akan digunakan dapat dicairkan kembali dengan menempatkan labu di dalam air mendidih. Untuk melapisi gelas obyek, diperlukan kurang lebih 3 ml agar cair yang dituangkan ke atasnya dengan menggunakan pipet.

Selain dua tes tersebut terdapat juga tes yang digunakan untuk mengkonfirmasi bercak darah tersebut, yaitu :

3. Pemeriksaan Mikroskopik ⁽⁴⁾

Pemeriksaan ini bertujuan untuk melihat morfologi sel darah merah.

Cara pemeriksaan :

Darah yang masih basah atau baru mengering ditaruh pada kaca obyek kemudian ditambahkan 1 tetes larutan garam faal, dan ditutup dengan kaca penutup, lihat dibawah mikroskop.

Cara lain, dengan membuat sediaan apus dengan pewarnaan Wright atau Giemsa.

Hasil :

Pemeriksaan mikroskopik kedua sediaan tersebut hanya dapat menentukan kelas dan bukan spesies darah tersebut.

Kelas mamalia mempunyai sel darah merah berbentuk cakram dan tidak berinti, sedangkan kelas lainnya berbentuk oval atau elips dan tidak berinti Bila terlihat adanya drum stick dalam jumlah lebih dari 0,05%, dapat dipastikan bahwa darah tersebut berasal dari seorang wanita.

Kelebihan:

Dapat terlihatnya sel –sel leukosit berinti banyak. Dapat terlihat adanya drum stick pada pemeriksaan darah seorang wanita.

Pemeriksaan lanjutan yang dapat dilakukan setelah suatu bercak merah benar bercak darah dan benar bercak darah manusia, meliputi :

Penentuan Golongan Darah ^{(1), (4)}

American Association of Blood Banks mendefinisikan golongan darah sebagai kumpulan antigen yang diproduksi oleh alel gen. Bagaimanapun, golongan darah secara genetic dikontrol dan merupakan karakteristik yang seumur hidup dapat diperiksa karena berbeda pada tiap individual.

Darah yang telah mengering dapat berada dalam pelbagai tahap kesegaran.

Bercak dengan sel darah merah masih utuh.

Bercak dengan sel darah merah sudah rusak tetapi dengan aglutinin dan antigen yang masih dapat di deteksi;

Sel darah merah sudah rusak dengan jenis antigen yang masih dapat dideteksi namun sudah terjadi kerusakan aglutinin.

Sel darah merah sudah rusak dengan antigen dan agglutinin yang juga sudah tidak dapat dideteksi.

Bila didapatkan sel darah merah dalam keadaan utuh

Penentuan golongan darah dapat dilakukan secara langsung seperti pada penentuan golongan darah orang hidup, yaitu dengan meneteskan 1 tetes antiserum ke atas 1 tetes darah dan dilihat terjadinya aglutinasi. Aglutinasi yang terjadi pada suatu antiserum merupakan golongan darah bercak yang diperiksa, contoh bila terjadi aglutinasi pada antiserum A maka golongan darah bercak darah tersebut adalah A.

Figure1. Penentuan golongan darah ABO cara makroskopik

Bila sel darah merah sudah rusak

Penentuan golongan darah dapat dilakukan dengan cara menentukan jenis aglutinin dan antigen. Antigen mempunyai sifat yang jauh lebih stabil dibandingkan dengan aglutinin. Di antara system-sistem golongan darah, yang paling lama bertahan adalah antigen dari system golongan darah ABO.

Penentuan jenis antigen dapat dilakukan dengan cara absorpsi inhibisi, absorpsi elusi atau aglutinasi campuran. Cara yang biasa dilakukan adalah cara absorpsi elusi dengan prosedur sebagai berikut: ⁽²⁾

Cara pemeriksaan :

2-3 helai benang yang mengandung bercak kering difiksasi dengan metil alcohol selama 15 menit. Benang diangkat dan dibiarkan mengering. Selanjutnya dilakukan penguraian benang tersebut menjadi serat-serat halus dengan menggunakan 2 buah jarum. Lakukan juga terhadap benang yang tidak mengandung bercak darah sebagai control negative.

Serat benang dimasukkan ke dalam 2 tabung reaksi. Ke dalam tabung pertama diteteskan serum anti-A dan kedalam tabung kedua serum anti-B hingga serabut benang tersebut teredam seluruhnya. Kemudian tabung-tabung tersebut disimpan dalam lemari pendingin dengan suhu 4 derajat Celcius selama satu malam.

Lakukan pencucian dengan menggunakan larutan garam faal dingin (4 derajat Celcius) sebanyak 5-6 kali lalu tambahkan 2 tetes suspense 2% sel indicator (sel daram merah golongan A pada tabung pertama dan golongan B pada tabung kedua), pusing dengan kecepatan 1000 RPM selama 1 menit. Bila tidak terjadi aglutinasi, cuci sekali lagi dan kemudian tambahkan 1-2 tetes larutan garam faal dingin. Panaskan pada suhu 56 derajat Celcius selama 10 menit dan pindahkan eluat ke dalam tabung lain. Tambahkan 1 tetes suspense sel indicator ke dalam masing-masing tabung, biarkan selama 5 menit, lalu pusing selama 1 menit pada kecepatan 1000 RPM.

Hasil :

Pembacaan hasil dilakukan secara makroskopik. Bila terjadi aglutinasi berarti darah mengandung antigen yang sesuai dengan antigen sel indicator.

Pemeriksaan golongan darah juga dapat membantu mengatasi kasus paternitas. Hal ini berdasarkan Hukum Mendel yang mengatakan bahwa antigen tidak mungkin muncul pada anak, jika antigen tersebut tidak terdapat pada salah satu atau kedua orang tuanya. Orang tua yang homozigotik pasti meneruskan gen untuk antigen tersebut kepada anaknya. (Anak dengan golongan darah O tidak mungkin mempunyai orang tua yang bergolongan darah AB).

Perlu diingat bahwa Hukum Mendel tetap berdasarkan kemungkinan (probabilitas), sehingga penentuan ke-ayah-an dari seorang anak tidak dapat dipastikan, namun sebaliknya kita dapat memastikan seseorang adalah bukan ayah seorang anak (“singkir ayah”/”paternity exclusion”).

Contoh-contoh kasus.

Bayi tertukar.

Dilakukan pemeriksaan sistim golongan darah dari bayi serta kedua orang tuanya.

Table. Kasus bayi tertukar. Penentuanbercasarkangolongandarah ABO.

	Bayi I	Bayi II
	A	O
Pria	O	AB
Wanita	O	O

Jelas bayi II adalah anak dari pasangan I, sedangkan bayi I anak anak pasangan II.

Table. Kasus bayi tertukar. Penentuan berdasarkan golongan darah ABO.

	Bayi I	Bayi II
	AB	A
Pria	A	AB
Wanita	B	O

Jelas bayi I adalah anak pasangan I, tidak mungkin sebagai anak pasangan II, sedangkan bayi II adalah anak dari pasangan II, walaupun pasangan I mungkin saja mempunyai anak bergolongan darah A.

Ragu ayah (disputed paternity).

Dalam kasus ini siapa saja ayah yang sebenarnya dari seorang anak masih diragukan.

Table. Kasus ragu ayah. Penentuan berdasarkan golongan darah ABO.

	Golongan darah
Bayi	B MNS Rhesus +
Ibu	A MNS Rhesus +
Pria I	AB MNS Rhesus +
Pria II	O MS Rhesus +
Pria III	A MNS Rhesus +

Pria I tidak dapat disingkirkan kemungkinan menjadi ayah si anak, sedangkan Pria II dan III pasti bukan ayah anak tersebut.

Ayah yang curiga si anak bukanlah anaknya yang sejati.

Table. Kasus ragu ayah. Curiga bukan anak yang sejati.

	Golongan Darah
Anak	O MNS Rhesus +
Ibu	A MS Rhesus +
“Ayah”	B MS Rhesus +

Anak tersebut pasti bukan anak dari “Ayah” tersebut.

Demikian pula kasus-kasuslainnyadapatdibantupenyelesaiannyadengan cara yang sama sepertidiatas.

Bila dicurigai penyebab kematian adalah keracunan maka dapat dilakukan pemeriksaan darah sebagai berikut :

1. Pemeriksaan CO (karbon monoksida)⁽²⁾

a). Untuk penentuan COHb secara kualitatif dapat dikerjakan uji difusi alkali.

i. Ambil 2 tabung reaksi. Masukkan ke dalam tabung pertama 1-2 tetes darah korban dan tabung kedua 1-2 tetes darah normal sebagai kontrol. Encerkan masing-masing darah dengan menambahkan 10 ml air sehingga warna merah pada kedua tabung kurang lebih sama.

ii. Tambahkan pada masing-masing tabung 5 tetes larutan NaOH 10-20%, lalu dikocok. Darah normal segera berubah warna menjadi merah hijau kecoklatan karena segera terbentuk hematin alkali, sedangkan darah yang mengandung COHb tidak berubah warnanya untuk beberapa waktu, tergantung pada konsentrasi COHb, karena COHb lebih bersifat resisten terhadap pengaruh alkali. COHb dengan kadar saturasi 20% memberi warna merah muda (pink) yang bertahan selama beberapa detik, dan setelah 1 menit baru berubah warna menjadi coklat kehijauan.

iii. Perlu diperhatikan bahwa darah yang dapat digunakan sebagai kontrol dalam uji dilusi alkali ini haruslah darah dengan Hb yang normal. Jangan gunakan darah foetus karena dikatakan bahwa darah foetus juga bersifat resisten terhadap alkali.

b).  Dapat pula dilakukan uji formalin (Eachloz-Liebmann).

Darah yang akan diperiksa ditambahkan larutan formalin 40% sama banyaknya. Bila darah mengandung COHb 25% saturasi maka akan terbentuk koagulat berwarna merah yang mengendap pada dasar tabung reaksi. Semakin tinggi kadar COHb, semakin merah warna koagulatnya. Sedangkan pada darah normal akan terbentuk koagulat yang berwarna coklat.

c).  Cara Gettler-Freimuth (semi-kuantitatif)

Prinsipnya sebagai berikut :

Darah + Kalium ferisianida  CO dibebaskan dari COHb

CO + PdCl₂ + H₂O  Pd + CO₂ + HCl

Paladium (Pd) ion akan diendapkan pada kertas saring berupa endapan berwarna hitam. Dengan membandingkan intensitas warna hitam tersebut dengan warna hitam yang diperoleh dari pemeriksaan terhadap darah dengan kadar COHb yang diketahui, maka dapat ditentukan konsentrasi COHb secara semi kuantitatif.

2. Pemeriksaan Alkohol⁽²⁾

Bau alkohol bukan merupakan diagnosis pasti keracunan. Diagnosis pasti hanya dapat ditegakkan dengan pemeriksaan kuantitatif kadar alkohol darah. Kadar alkohol dari udara ekspirasi dan urin dapat dipakai sebagai pilihan kedua. Untuk korban meninggal sebagai pilihan kedua dapat diperiksa kadar alkohol dalam otak, hati, atau organ lain atau cairan tubuh lain seperti cairan serebrospinalis.

Penentuan kadar alkohol dalam lambung saja tanpa menentukan kadar alkohol dalam darah hanya menunjukkan bahwa orang tersebut telah minum alkohol. Pada mayat, alkohol dapat didifusi dari lambung ke jaringan sekitarnya termasuk ke dalam jantung, sehingga untuk pemeriksaan toksikologik, diambil darah dari pembuluh darah vena perifer (kubiti atau femoralis).

Salah satu cara penentuan semikuantitatif kadar alkohol dalam darah yang cukup sederhana adalah teknik modifikasi mikrodifusi (Conway), sebagai berikut :

Letakkan 2 ml reagen Antie ke dalam ruang tengah. Reagen Antie dibuat dengan melarutkan 3,70 gr kalium dikromat ke dalam 150 ml air. Kemudian tambahkan 280 ml asam sulfat dan terus diaduk. Encerkan dengan 500 ml akuades. Sebarkan 1 ml darah yang akan diperiksa dalam ruang sebelah luar dan masukkan 1 ml kalium karbonat jenuh dalam ruang sebelah luar pada sisi berlawanan.

Tutup sel mikrodifusi, goyangkan dengan hati-hati supaya darah bercampur dengan larutan kalium karbonat. Biarkan terjadi difusi selama 1 jam pada temperatur ruang. Kemudian angkat tutup dan amati perubahan warna pada reagen Antie.

Warna kuning kenari menunjukkan hasil negatif. Perubahan warna kuning kehijauan menunjukkan kadar etanol sekitar 80mg %, sedangkan warna hijau kekuningan sekitar 300mg %.

Kadar alkohol darah yang diperoleh dari pemeriksaan belum menunjukkan kadar alkohol darah pada saat kejadian. Hasil ini akibat dari pengambilan darah dilakukan beberapa saat setelah kejadian, sehingga yang dilakukan adalah perhitungan kadar alkohol darah saat kejadian. Meskipun kecepatan eliminasi kira-kira 14-15 mg%, namun pada perhitungan harus juga dipertimbangkan kemungkinan kesalahan pengukuran dan kesalah perkiraan kecepatan eliminasi. Gruner (1975) menganjurkan angka 10 mg% per jam digunakan dalam perhitungan. Sebagai contoh, bila ditemukan kadar alkohol darah 50mg% yang diperiksa 3 jam setelah kejadian, akan memberikan angka 80 mg% pada saat kejadian.

3. Pemeriksaan Insektisida⁽²⁾

Untuk pemeriksaan toksikologik insektisida perlu diambil darah, jaringan hati, limpa, paru-paru dan lemak badan.

Penentuan kadar AchE dalam darah dan plasma dapat dilakukan dengan cara tintimeter (Edson) dan cara paper-strip (Acholest).

Cara Edson : berdasarkan perubahan pH darah

AChE

Ach —— > kolin + asam asetat

Ambil darah korban dan tambahkan indikator brom-timol-biru, diamkan beberapa saat maka akan terjadi perubahan warna. Bandingkan warna yang timbul dengan warna standar pada comparator disc (cakram pembanding), maka dapat ditentukan AchE dalam darah.

Table. Interpretasi Hasil pada Tes Edson.

% aktifitas AchE darah	Interpretasi
75% – 100% dari normal	Tidak ada keracunan
50% – 75% dari normal	Keracunan ringan
25% – 50% dari normal	Keracunan
0% – 25% dari normal	Keracunan berat

Cara Acholest :

Ambil serum darah korban dan teteskan pada kertas Acholest bersamaan dengan kontrol serum darah normal. Pada kertas Acholest sudah terdapat Ach dan indikator. Waktu perubahan warna pada kertas tersebut dicatat. Perubahan warna harus sama dengan perubahan warna pembanding (serum normal) yaitu warna kuning telur.

Interpretasi :

Kurang dari 18 menit  tidak ada keracunan

20-35 menit  keracunan ringan

35-150 menit  keracunan berat

Kromatografi lapisan tipis (TLC)

Kaca berukuran 20 x 20 cm, dilapisi dengan absorben gel silikat atau dengan aluminium oksida, lalu dipanaskan dalam oven 110 derajat celcius selama 1 jam.

Filtrat yang akan diperiksa (hasil ekstraksi dari darah atau jaringan korban) diteteskan dengan mikropipet pada kaca. Disertai dengan tetesan lain yang telah diketahui golongan dan jenis serta konsentrasinya sebagai pembanding. Ujung kaca TLC dicelupkan ke dalam pelarut, biasanya n-Hexan. Celupan tidak boleh mengenai tetesan tersebut di atas. Dengan daya kapilaritas maka pelarut akan ditarik ke atas sambil melarutkan filtrat-filtrat tadi. Setelah itu kaca TLC dikeringkan lalu disemprot dengan reagensia Paladium klorida 0,5% dalam HCl pekat, kemudian dengan Difenilamin 0,5% dalam alkohol.

Hasilnya :

Warna hitam (gelap) berarti golongan hidrokarbon terklorinasi. Warna hijau dengan dasar dadu berarti golongan organofosfat. Untuk menentukan jenis dalam golongannya dapat dilakukan dengan menentukan Rf masing-masing bercak.

Rf = jarak yang ditempuh bercak

Jarak yang ditempuh pelarut

Angka yang didapat dicocokan dengan standar, maka jenisnya dapat ditentukan. Dengan membandingkan besar bercak dan intensitas warnanya dengan pembanding, dapat diketahui konsentrasi secara semikuantitatif.

4. Pemeriksaan Sianida⁽²⁾

Uji kertas saring.

Kertas saring dicelupkan ke dalam larutan asam pikrat jenuh, biarkan hingga menjadi lembab. Teteskan satu tetes isi lambung atau darah korban, diamkan sampai agak mengering, kemudian teteskan Na₂CO₃ 10 % 1 tetes. Uji positif bila terbentuk warna ungu.

Kertas saring dicelupkan ke dalam larutan HNO₃ 1%, kemudian ke dalam larutan kanji 1% dan keringkan. Setelah itu kertas saring dipotong-potong seperti kertas lakmus. Kertas ini dipakai untuk pemeriksaan masal pada pekerja yang diduga kontak dengan CN. Caranya dengan membasahkan kertas dengan ludah di bawah lidah. Uji positif bila warna berubah menjadi biru. Hasil uji berwarna biru muda meragukan sedangkan bila warna tidak berubah (merah muda) berarti tidak dapat keracunan.

Kertas saring dicelup ke dalam larutan KCL, dan dipotong kecil-kecil. Kertas tersebut dicelupkan ke dalam darah korban, bila positif maka warna akan berubah menjadi merah terang karena terbentuk sianmethemoglobin.

2.a. Pemeriksaan Laboratorium Forensik Cairan Mani & Spermatozoa ^{(2), (5)}

Cairan mani merupakan cairan agak putih kekuningan, keruh dan berbau khas. Cairan mani pada saat ejakulasi kental kemudian akibat enzim proteolitik menjadi cair dalam waktu yang singkat (10 – 20 menit). Dalam keadaan normal, volume cairan mani 3 – 5 ml pada 1 kali ejakulasi dengan pH 7,2 – 7,6.

Cairan mani mengandung spermatozoa, sel-sel epitel dan sel-sel lain yang tersuspensi dalam cairan yang disebut plasma seminal yang mengandung spermion dan beberapa enzim sepertri fosfatase asam. Spermatozoa mempunyai bentuk yang khas untuk spesies tertentu dengan jumlah yang bervariasi, biasanya antara 60 sampai 120 juta per ml.

Sperma itu sendiri didalam liang vagina masih dapat bergerak dalam waktu 4 – 5 jam post-coitus; sperma masih dapat ditemukan tidak bergerak sampai sekitar 24-36 jam post coital dan bila wanitanya mati masih akan dapat ditemukan 7-8 hari

Pemeriksaan cairan mani dapat digunakan untuk membuktikan :

1. Adanya persetubuhan melalui penentuan adanya cairan mani dalam labia minor atau vagina yang diambil dari forniks posterior

2. Adanya ejakulasi pada persetubuhan atau perbuatan cabul melalui penentuan adanya cairan mani pada pakaian, seprai, kertas tissue, dsb.

Teknik Pengambilan bahan untuk pemeriksaan laboratorium untuk pemeriksaan cairan mani dan sel mani dalam lendir vagina, yaitu dengan mengambil lendir vagina menggunakan pipet pasteur atau diambil dengan ose batang gelas, atau swab. Bahan diambil dari forniks posterior, bila mungkin dengan spekulum. Pada anak-anak atau bila selaput darah masih utuh, pengambilan bahan sebaiknya dibatasi dari vestibulum saja.

Pemeriksaan yang dapat dilakukan meliputi :

1. Penentuan spermatozoa (mikroskopis)

Tujuan : Menentukan adanya sperma

- Bahan pemeriksaan : cairan vagina

- Metode pemeriksaan :

Tanpa pewarnaan

Untuk melihat motilitas spermatozoa. Pemeriksaan ini paling bermakna untuk memperkirakan saat terjadinya persetubuhan

Cara pemeriksaan :

Letakkan satu tetes cairan vagina pada kaca objek kemudian ditutup. Periksa dibawah mikroskop dengan pembesaran 500 kali. Perhatikan pergerakkan spermatozoa

Hasil :

Umumnya disepakati dalam 2 – 3 jam setelah persetubuhan masih dapat ditemukan spermatozoa yang bergerak dalam vagina. Haid akan memperpanjang waktu ini sampai 3 – 4 jam. Berdasarkan beberapa penelitian, dapat disimpulkan bahwa spermatozoa masih dapat ditemukan 3 hari, kadang – kadang sampai 6 hari pasca persetubuhan. Pada orang mati, spermatozoa masih dapat ditemukan hingga 2 minggu pasca persetubuhan, bahkan mungkin lebih lama lagi.

Dengan Pewarnaan

Cara pemeriksaan :

Buat sediaan apus dan fiksasi dengan melewatkan gelas sediaan apus tersebut pada nyala api. Pulas dengan HE, biru metilen atau hijau malakit

Cara pewarnaan yang mudah dan baik untuk kepentingan forensik adalah pulasan dengan hijau malakit dengan prosedur sebagian berikut :

Buat sediaan apus dari cairan vaginal pada gelas objek, keringkan diudara, dan fiksasi dengan melewatkan gelas sediaan apus tersebut pada nyala api, warnai dengan Malachite-green 1% dalam air, tunggu 10-15 menit, cuci dengan air, warnai dengan larutan Eosin Yellowish 1 % dalam air, tunggu selama 1 menit, cuci lagi dengan air, keringkan dan periksa dibawah mikroskop.

Hasil :

Keuntungan dengan pulasan ini adalah inti sel epitel dan leukosit tidak terdiferensiasi, sel epitel berwarna merah muda merata dan leukosit tidak terwarnai. Kepala spermatozoa tampak merah dan lehernya merah muda, ekornya berwarna hijau

Bila persetubuhan tidak ditemukan, belum tentu dalam vagina tidak ada ejakulat karena kemungkinan azoosperma atau pascavasektomi. Bila hal ini terjadi, maka perlu dilakukan penentuan cairan mani dalam cairan vagina.

2. Penentuan Cairan Mani (kimiawi)

Untuk membuktikan terjadinya ejakulasi pada persetubuhan dari ditemukan cairan mani dalam sekret vagina, perlu dideteksi adanya zat-zat yang banyak terdapat dalam cairan mani, yaitu dengan pemeriksaan laboratorium :

a. Reaksi Fosfatase Asam

Merupakan tes penyaring adanya cairan mani, menentukan apakah bercak tersebut adalah bercak mani atau bukan, sehingga harus selalu dilakukan pada setiap sampel yang diduga cairan mani sebelum dilakukan pemeriksaan lain. Reaksi fosfatase asam dilakukan bila pada pemeriksaan tidak ditemukan sel spermatozoa. Tes ini tidak spesifik, hasil positif semu dapat terjadi pada feses, air teh, kontrasepsi, sari buah dan tumbuh-tumbuhan.

Dasar reaksi (prinsip) :

Adanya enzim fosfatase asam dalam kadar tinggi yang dihasilkan oleh kelenjar prostat. Enzim fosfatase asam menghidrolisis natrium alfa naftil fosfat. Alfa naftol yang telah dibebaskan akan bereaksi dengan brentamin menghasilkan zat warna azo yang berwarna biru ungu. Bahan pemeriksaan yang digunakan adalah cairan vaginal.

Reagen :

Larutan A

Brentamin Fast Blue B 1 g (1)

Natrium asetat trihidrat 20 g (2)

Asam asetat glasial 10 ml (3)

Askuades 100 ml (4)

(2) dan (3) dilarutkan dalam (4) untuk menghasilkan larutan penyangga dengan pH 5, kemudian (1) dilarutkan dalam larutan peyangga tersebut.

Larutan B

Natrium alfa naftil fosfat 800 mg + aquades 10 ml.

89 ml Larutan A ditambah 1 ml larutan B, lalu saring cepat ke dalam botol yang berwarna gelap. Jika disimpan dilemari es, reagen ini dapat bertahan berminggu-minggu dan adanya endapan tidak akan mengganggu reaksi.

Cara pemeriksaan :

Bahan yang dicurigai ditempelkan pada kertas saring yang terlebih dahulu dibasahi dengan aquades selama beberapa menit. Kemudian kertas saring diangkat dan disemprotkan / diteteskan dengan reagen. Ditentukan waktu reaksi dari saat penyemprotan sampai timbul warna ungu, karena intensitas warna maksimal tercapai secara berangsur-angsur.

Hasil :

Bercak yang tidak mengandung enzim fosfatase memberikan warna serentak dengan intensitas tetap, sedangkan bercak yang mengandung enzim tersebut memberikan intensitas warna secara berangsur-angsur.

Waktu reaksi 30 detik merupakan indikasi kuat adanya cairan mani. Bila 30 – 65 detik, masih perlu dikuatkan dengan pemeriksaan elektroforesis. Waktu reaksi > 65 detik, belum dapat menyatakan sepenuhnya tidak terdapat cairan mani karena pernah ditemukan waktu reaksi > 65 detik tetapi spermatozoa positif.

Enzim fosfatase asam yang terdapat di dalam vagina memberikan waktu reaksi rata-rata 90 – 100 detik. Kehamilan, adanya bakteri-bakteri dan jamur, dapat mempercepat waktu reaksi.

b. Reaksi Florence

Reaksi ini dilakukan bila terdapat azoospermia/tidak ditemukan spermatozoa atau cara lain untuk menentukan semen tidak dapat dilakukan.

Dasar :

Menentukan adanya kolin.

Reagen (larutan lugol) dapat dibuat dari :

Kalium yodida 1,5 g

Yodium 2,5 g

Akuades 30 ml

Cara pemeriksaan :

Cairan vaginal ditetesi larutan reagen, kemudian lihat dibawah mikroskop.

Hasil :

Bila terdapat mani, tampak kristal kolin periodida coklat berbentuk jarum dengan ujung sering terbelah.

Test ini tidak khas untuk cairan mani karena bahan yang berasal dari tumbuhan atau binatang akan memperlihatkan kristal yang serupa tetapi hasil postif pada test ini dapat menentukan kemungkinan terdapat cairan mani dan hasil negative menentukan kemungkinan lain selain cairan mani.

c. Reaksi Berberio

Reaksi ini dilakukan dan mempunyai arti bila mikroskopik tidak ditemukan spermatozoa.

Dasar reaksi :

Menentukan adanya spermin dalam semen.

Reagen :

Larutan asam pikrat jenuh.

Cara pemeriksaan (sama seperti pada reaksi Florence) :

Bercak diekstraksi dengan sedikit akuades. Ekstrak diletakkan pada kaca objek, biarkan mengering, tutup dengan kaca penutup. Reagen dialirkan dengan pipet dibawah kaca penutup.

Hasil :

Hasil positif bila, didapatkan kristal spermin pikrat kekuningan berbentuk jarum dengan ujung tumpul. Kadang-kadang terdapat garis refraksi yang terletak longitudinal. Kristal mungkin pula berbentuk ovoid.

3. Penentuan Golongan Darah ABO Pada Cairan Mani

Pada individu yang termasuk golongan sekretor (85% dari populasi), substansi golongan darah dapat dideteksi dalam cairan tubuhnya seperti air liur, sekret vagina, cairan mani, dan lain-lain. Substansi golongan darah dalam cairan mani jauh lebih banyak dari pada air liur (2 – 100 kali). Hanya golongan sekretor saja yang golongan darahnya dapat ditentukan dalam semen yaitu dilakukan dengan cara absorpsi inhibisi.

Table. Gambaran substansi golongan darah dalam bahan pemeriksaan yang berasal dari forniks posterior vagina.

	Golongan Darah Wanita
	O	A	B	AB
Substansi ”sendiri” dalam sekret vagina	H	A A + H	B B + H	A + B
Substansi “asing” berasal dari semen	A B A + B	B H*	A H*	H* A + H

Hasil :

Adanya substansi ‘asing’ menunjukkan di dalam vagina wanita tersebut terdapat cairan mani.

4. Pemeriksaan Bercak Mani Pada Pakaian

a. Secara visual

Bercak mani berbatas tegas dan warnanya lebih gelap daripada sekitarnya. Bercak yang sudah agak tua berwarna kekuningan.

Pada bahan sutera / nilon, batas sering tidak jelas, tetapi selalu lebih gelap daripada sekitarnya.

Pada tekstil yang tidak menyerap, bercak segar menunjukkan permukaan mengkilat dan translusen kemudian mengering. Dalam waktu kira-kira 1 bulan akan berwarna kuning sampai coklat.

Pada tekstil yang menyerap, bercak segar tidak berwarna atau bertepi kelabu yang berangsur-angsur menguning sampai coklat dalam waktu 1 bulan.

Dibawah sinar ultraviolet, bercak semen menunjukkan flouresensi putih. Bercak pada sutera buatan atau nilon mungkin tidak berflouresensi. Flouresensi terlihat jelas pada bercak mani pada bahan yang terbuat dari serabut katun. Bahan makanan, urin, sekret vagina, dan serbuk deterjen yang tersisa pada pakaian sering berflouresensi juga.

b. Secara taktil (perabaan)

Bercak mani teraba kaku seperti kanji. Pada tekstil yang tidak menyerap, bila tidak teraba kaku, masih dapat dikenali dari permukaan bercak yang teraba kasar.

c. Skrining awal (dengan Reagen fosfatase asam)

Cara pemeriksaan :

Sehelai kertas saring yang telah dibasahi akuades ditempelkan pada bercak yang dicurigai selama 5 – 10 menit. Keringkan lalu semprotkan / teteskan dengan reagen. Bila terlihat bercak ungu, kertas saring diletakkan kembali pada pakaian sesuai dengan letaknya semula untuk mengetahui letak bercak pada kain.

d. Uji pewarnaan Baecchi

Reagen dapat dibuat dari :

Asam fukhsin 1 % 1 ml

Biru metilen 1 % 1 ml

Asam klorida 1 % 40 ml

Cara Pemeriksaan :

Gunting bercak yang dicurigai sebesar 5 mm x 5 mm pada bagian pusat bercak. Bahan dipulas dengan reagen Baecchi selama 2 – 5 menit, dicuci dalam HCL 1 % dan dilakukan dehidrasi berturut-turut dalam alkohol 70 %, 80 % dan 95 – 100 % (absolut). Lalu dijernihkan dalam xylol (2x)dan keringkan di antara kertas saring.

Ambillah 1 – 2 helai benang dengan jarum.Letakkan pada gelas objek dan uraikan sampai serabut-serabut saling terpisah. Tutup dengan kaca penutup dan balsem Kanada. Periksa dengan mikroskop pembesaran 400 x.

Hasil :

Serabut pakaian tidak berwarna, spermatozoa dengan kepala berwarna merah dan ekor berwarna merah muda terlihat banyak menempel pada serabut benang.

Pemeriksaan Pria Tersangka ⁽²⁾

Untuk membuktikan bahwa seorang pria baru saja melakukan persetubuhan dengan seseorang wanita.

Cara lugol

Kaca objek ditempelkan dan ditekan pada glans penis, terutama pada bagian kolum, korona serta frenulum, kemudian letakkan dengan spesimen menghadap kebawah diatas tempat yang berisi larutan ligol dengan tujuan agar uap yodium akan mewarnai sediaan tersebut. Hasil akan menunjukkan sel-sel epitel vagina dengan sitoplasma berwarna coklat karena mengandung banyak glikogen.

Untuk memastikan bahwa sel epitel berasal dari seorang wanita, perlu ditentukan adanya kromatin seks (barr bodies) pada inti. Dengan pembesaran besar, perhatikan inti sel epitel yang ditemukan dan cari barr bodies. Ciri-cirinya adalah menempel erat pada permukaan membran inti dengan diameter kira-kira 1 µ yang berbatas jelas dengan tepi tajam dan terletak pada satu dataran fokus dengan inti.

Kelemahan pemeriksaan ini adalah bila persetubuhan tersebut telah berlangsung lama atau telah dilakukan pencucian pada alat kelamin pria, maka pemeriksaan ini tidak akan berguna lagi.

Pada dasarnya pemeriksaan laboratorium forensik pada korban wanita dewasa dan anak-anak adalah sama, yang membedakan adalah pendekatan terhadap korban

Pengumpulan barang bukti harus dilakukan jika hubungan seksual terjadi dalam 72 jam sebelum pemeriksaan fisik.

2.b. Pemeriksaan Laboratorium Forensik Cairan Lainnya

Air Liur ^{(2), (9)}

Air liur merupakan cairan yang dihasilkan oleh kelenjar liur. Air liur (saliva) terdiri dari air, enzim alfa amilase (ptialin), protein, lipid, ion-ion anorganik seperti tiosianat, klorida dan lain – lain.

Dalam bidang kedokteran forensik, pemeriksaan air liur penting untuk kasus-kasus dengan jejas gigitan untuk menentukan golongan darah pengigitnya. Golongan darah penggigit yang termasuk dalam golongan sekretor dapat ditentukan dengan cara absorpsi inhibisi.

Reagen yang digunakan yaitu anti A dan anti B dapat diperoleh dari laboratorium transfusi darah PMI, demikian pula dengan anti H. Anti H dapat dibuat dari biji-biji Ulex europaeus yang digerus dalam mortir. Tiap 1 g biji-bijian ditambahkan 10 ml salin. Kemudian campuran tadi dikocok dengan mesin pengocok selam 1 jam dan dipusing selama 5 menit dengan kecepatan 3000 RPM. Cairan supernatan disaring dan dapat segera dipergunakan.

Untuk pemeriksaan perlu dilakukan kontrol dengan air liur yang telah diketahui golongan sekretor atau non sekretor.

Cara absorpsi inhibisi :

Basahkan bercak liur dengan 0,5 ml salin, kemudian peras dan tempatkan air liur atau ekstrak air liur dalam salin tadi ke dalam tabung reaksi, lalu panaskan dalam air mendidih selama 10 menit. Pusing dan ambil supernatant, bila mau dimpan maka simpan pada suhu 20 C.

Dalam tabung reaksi 1 vol air liur ditambahkan 1 vol antiserum. Campuran tersebut didiamkan selama 30 menit pada suhu ruang untuk proses absopsi.

Selama menunggu, tentukan titer anti A, anti B dan anti H yang digunakan. Setelah 30 menit berlalu, pada campuran tersebut ditentukan titer anti A, anti B dan anti H dengan cara yang sama.

SDM yang digunakan adalah suspensi 4 % yang berumur kurang dari 24 jam. Bandingkan titer antisera yang digunakan dengan titer campuran antiserum + air liur.

Hasil positif bila titer berkurang lebih dari 2 kali.

Urine

a. Pemeriksaan untuk Timbal ⁽²⁾

Normal kadar Pb dalam darah kurang dari 60 mikro gr/ 100 ml. Bila lebih dari 70 mikro gr/100 ml berarti ada pemaparan abnormal. Bila lebih dari 100 mikro gr/100 ml berarti telah terjadi keracunan.

Pemeriksaan laboratorium untuk menentukan Pb dalam urin dapat dengan cara sebagai berikut :

Ke dalam urin ditambahkan H₂SO₄ encer sehingga terbentuk endapan PbSO₄ berwarna putih, lalu disaring. Endapan ini tak larut dalam HNO3 tapi larut dalam HCl atau NH4-asetat. Untuk pemeriksaan Pb dalam urin sebaiknya digunakan urin 24 jam.

Dalam urin kadar Pb normal 0,5 mikro gr/ 100 ml. Pemaparan abnormal bila sama atau lebih besar dari 8 mikro gr/ 100 ml, sedangkan keracunan bila sama atau lebih besar dari 20 mikro gr/ 100 ml. Pada keracunan didapatkan pula kadar koproporfirin 80 mikro gr/ 100 ml kreatin, dan d-ALA 2 mg/ 100 mg kreatin.

Uji Koproporfirin

Untuk mengetahui adanya koproporfirin dalam urin, dilakukan uji sebagai berikut :

5 cc urin diasamkan dengan asam asetat glasial sehingga pH kurang dari 4, kemudian ditambahkan 5 tetes H₂O₂ 3% dan 5 cc eter, lalu dikocok. Lapisan air dibuang dan lapisan eter diambil, ditambahkan ke dalam 1 cc HCl 1,5 N, kocok, lapisan asam diambil, lihat dengan sinar UV. Bila berwarna merah berarti terdapat koproporfirin, jika biru atau biru muda berarti negatif.

Fluoresensi dan uji koproporfirin III dalam urin paling baik dilakukan untuk skrining masal.

b. Pemeriksaan untuk Alkohol

Seperti yang sudah dijelaskan sebelumnya, bau alkohol bukan merupakan diagnosis pasti keracunan. Diagnosis pasti hanya dapat ditegakkan dengan pemeriksaan kuantitatif kadar alkohol darah. Kadar alkohol dari udara ekspirasi dan urin dapat dipakai sebagai pilihan kedua. Untuk korban meninggal sebagai pilihan kedua dapat diperiksa kadar alkohol dalam otak, hati, atau organ lain atau cairan tubuh lain seperti cairan serebrospinalis.

Salah satu cara penentuan semikuantitatif kadar alkohol dalam urin yang cukup sederhana adalah teknik modifikasi mikrodifusi (Conway), sebagai berikut :

Letakkan 2 ml reagen Antie ke dalam ruang tengah. Reagen Antie dibuat dengan melarutkan 3,70 gr kalium dikromat ke dalam 150 ml air. Kemudian tambahkan 280 ml asam sulfat dan terus diaduk. Encerkan dengan 500 ml akuades. Sebarkan 1 ml urin yang akan diperiksa dalam ruang sebelah luar dan masukkan 1 ml kalium karbonat jenuh dalam ruang sebelah luar pada sisi berlawanan.

Tutup sel mikrodifusi, goyangkan dengan hati-hati supaya urin bercampur dengan larutan kalium karbonat. Biarkan terjadi difusi selama 1 jam pada temperatur ruang. Kemudian angkat tutup dan amati perubahan warna pada reagen Antie.

Warna kuning kenari menunjukkan hasil negatif. Perubahan warna kuning kehijauan menunjukkan kadar etanol sekitar 80mg %, sedangkan warna hijau kekuningan sekitar 300mg %.

^3. Pemeriksaan Laboratorium Forensik Rambut ^{(2), (6), (7), (8)}

Rambut manusia berbeda dengan rambut hewan pada sifat-sifat lapisan sisik (kutikula), gambaran korteks dan medula rambut.

Kutikula merupakan lapisan paling luar dari rambut, di bawahnya terletak korteks yang terdiri dari gabungan serabut-serabut dengan pigmen. Di tempat yang paling dalam/ tengah, terdapat medula yang mengandung pigmen dalam jumlah terbanyak.

Rambut manusia memiliki diameter sekitar 50-150 mikron dengan bentuk kutikula yang pipih, sedangkan rambut hewan memiliki diameter kurang dari 25 mikron atau lebih dari 300 mikron dengan kutikula yang kasar atau menonjol.

Pigmen pada rambut manusia sedikit dan terpisah-pisah sedangkan pada hewan padat dan tidak terpisah. Perbandingan diameter rambut hewan dengan diameter rambut manusia, indeks medula rambut manusia adalah 1:3, sedangkan indeks medula rambut hewan adalah 1:2 atau lebih besar. Pemeriksaan indeks medula merupakan pemeriksaan terpenting untuk membedakan rambut manusia dari rambut hewan.

Berdasarkan asal tumbuhnya, rambut manusia dibedakan atas rambut kepala; alis, bulu mata dan bulu hidung; kumis dan jenggot; rambut badan; rambut ketiak dan rambut kemaluan. Umumnya tidak terdapat perbedaan yang jelas antara jenis-jenis rambut tersebut di atas.

Rambut kepala umumnya kasar, lemas, lurus/ ikal/ keriting dan panjang dengan penampang melintang yang berbentuk bulat (pada rambut yang lurus), oval atau elips (pada rambut ikal/ keriting). Alis, bulu mata dan bulu hidung umumnya relatif kasar, kadang-kadang kaku dan pendek. Rambut kemaluan dan rambut ketiak lebih kasar sedangkan rambut badan halus dan pendek.

Pemeriksaan mikroskopik rambut utuh akan memperlihatkan akar, bagian tengah dan ujung yang lengkap. Pada rambut yang tercabut, rambut akan terlihat utuh disertai dengan jaringan kulit. Sebaliknya rambut yang lepas sendiri mempunyai akar yang mengerut tanpa jaringan kulit. Rambut yang terpotong benda tajam, dengan mikroskop terlihat terpotong rata, sedangkan akibat benda tumpul akan terlihat terputus tidak rata.

Panjang rambut kepala kadang-kadang dapat memberi petunjuk jenis kelamin. Tetapi untuk menentukan jenis kelamin yang pasti, harus dilakukan pemeriksaan terhadap sel-sel sarung akar rambut dengan larutan orcein. Pada rambut wanita dapat ditemukan adanya kromatin seks pada inti sel-sel tersebut.

Perkiraan umur berdasarkan pemeriksaan keadaan pigmen pada rambut sukar sekali dilakukan. Umumnya dapat dikatakan, bahwa bila usia bertambah maka rambut akan rontok. Rontoknya rambut pada pria umumnya terjadi pada dekade kedua atau ketiga, sedangkan pada wanita sering terjadi rontoknya rambut ketiak dan pertumbuhan rambut pada wajah pada saat menopouse. Rambut ketiak dan rambut kemaluan akan tumbuh pada usia pubertas.

Rambut, baik rambut kepala ataupun kelamin, merupakan bagian tubuh manusia yang dapat memberikan banyak informasi bagi kepentingan peradilan, antara lain tentang :

a. saat korban meninggal dunia

b. sebab kematian

c. jenis kejahatan

d. identitas korban

e. identitas pelaku

f. benda/ senjata yang digunakan

informasi tersebut di atas diperoleh dengan meneliti sifat-sifat gambaran mikroskopik serta perubahan-perubahan yang terjadi akibat trauma atau racun tertentu.

a. Saat meninggal dunia

Sifat- sifat dari rambut dapat dipakai untuk menentukan saat kematian korban antara lain :

Tingkat pertumbuhannya, yaitu sekitar 0,4 mm per hari

Pertumbuhan tersebut akan berhenti jika orang meninggal dunia. Atas sifat tersebut maka saat kematian dapat diperhitungkan asalkan diketahui kapan korban terakhir kali mencukur rambutnya.

Memang ada pendapat yang menyatakan bahwa rambut orang yang baru saja meninggal dunia masih dapat tumbuh menjadi lebih panjang, tetapi sebetulnya bertambah panjangnya rambut tersebut disebabkan oleh menuyusutnya kulit.

Lepasnya rambut akibat pembusukan.

Jika kematian sudah berlangsung 48 – 72 jam maka rambut kepala akan mudah lepas.

Perubahan warna

Perubahan warna rambut juga dapat dipakai untuk memperkirakan saat kematian. Pada penguburan yang dangkal perubahan warna terjadi sesudah 1 – 3 bulan, sedang pada penguburan yang dalam sesudah 6 – 12 bulan.

b. Sebab kematian

Informasi tentang sebab kematian juga dapat diperoleh melalui rambut mengingat beberapa racun tertentu, terutama racun metalik, disimpan di bagian tubuh tersebut.

c. Jenis kejahatan

Mengenai jenis kejahatan yang terjadi dapat diperkirakan dengan melihat macam rambut yang ditemukan. Adanya rambut pubes pada tubuh korban memberikan dugaan adanya tindak pidana perkosaan atau tndak pidana seksual lainnya dan adanya rambut binatang pada tubuh manusia atau sebaliknya juga dapat memberikan perkiraan adanya bestialiti.

d. Identitas korban

Rambut mempunyai sifat tahan terhadap pembusukan dan bahan-bahan kimia sehingga dapat dijadikan sarana identifikasi bagi mayat-mayat tidak dikenal yang sudah membusuk. Meskipun tak dapat memberikan identitas personal tetapi dari rambut paling tidak dapat ditemukan umur, jenis kelamin, ras, dan sebagainya.

e. Identitas pelaku

Rambut juga dapat dipakai sebagai sarana identifikasi guna mengetahui identitas pelakunya. Sebagaimana diketahui bahwa pada tindak pidana perkosaan dan pembunuhan, sering ditemukan rambut pelaku tertinggal atau berhasil dijambak oleh korban sehingga dapat dimanfaatkan untuk kepentingan identifikasi.

f. Benda/ senjata yang digunakan

Kerusakan pada rambut kadang-kadang menunjukkan ciri-ciri tertentu. Pukulan di kepala dapat meninggalkan kerusakan kortikal pada rambut, sedangkan tembakan senjata api dapat menyebabkan kebakaran pada rambut. Rambut yang terbakar tersebut akan terlihat, hitam, rapuh, terpilin atau menjadi keriting dan menimbulkan bau yang khas.

Keadaan pangkal rambut juga dapat dipakai sebagai petunjuk bagaimana rambut itu lepas. Pada pangkal rambut yang lepas secara alami akan terlihat atrofi, sedang pada rambut yang dicabut secara paksa akan mengalami robekan pada sarung rambut dan pada bulbus akan terlihat tak teratur.

Ditemukannya rambut pada senjata juga dapat memberi petunjuk tentang adanya kaitan antara senjata itu dengan kasus pembunuhan dan ditemukannya rambut pada kendaraan bermotor juga dapat meberi petunjuk tentang keterlibatan kendaraan tersebut dalam peristiwa tabrakan.

Jika ditemukan rambut yang diduga ada kaitannya dengan kejahatan maka hendaknya rambut tersebut diperiksa dengan teliti untuk mengetahui :

1. Keaslian rambut

Pemeriksaan keaslian rambut perlu dilakukan mengingat adanya berbagai serat yang bentuk dan warnanya mirip rambut.

Rambut yang utuh biasanya terdiri atas akar, batang dan ujung. Akar ranbut terdiri atas jaringan ikat longgar sedangkan batang rambut terdiri atas kutikula, korteks dan medula. Serat yang bukan berasal dari rambut tidak mempunyai susunan seperti itu. Serat sintetis misalnya, gambaran mikroskopiknya terlihat homogen.

2. Penentuan rambut manusia atau bukan

Jika hasil pemeriksaan menunjukkan bahwa serat itu rambut maka langkah selanjutnya adalah menentukan apakah rambut tersebut berasal dari manusia atau hewan.

Ciri rambut manusia yaitu halus dan tipis, kutikula mempunyai sisik kecil dan bergerigi, medula sempit atau kadang-kadang tak ada, kortek tebal, index medulla kurang dari 0,3 dan pigmennya lebih ke arah perifer. Sedangkan, ciri rambut binatang ialah kasar dan tebal, kutikula mempunyai sisik lebar dan polihidral, medula lebar, kortek tipis, index medulla lebih dari 0,5 dan pigmennya di perifer maupun di sentral. Dengan tes presipitasi akan dapat dibedakan dengan tepat antara rambut manusia dan rambut binatang.

3. Identifikasi

Jika sudah dapat dipastikan rambut manusia maka pemeriksaan lanjutan perlu dilakukan untuk menentukan siapa pemiliknya. Perlu diketahui bahwa rambut mempunyai sifat tahan terhadap pembusukan dan bahan-bahan kimia sehingga dapat dijadikan salah satu sarana identifikasi bagi mayat-mayat yang sudah membusuk. Meskipun tak dapat memberikan identitas personal seperti halnya sidik jari, tetapi dapat memberikan identitas umum, antara lain :

a. Umur

Umur dari pemilik rambut dapat ditentukan dengan memeriksa rambut tersebut berdasarkan tempat tumbuh dan warnanya.

Tumbuhnya rambut di berbagai bagian tubuh berbeda-beda waktunya. Rambut pubis dan rambut ketiak misalnya, tumbuh pada masa adolesen. Selain itu warna rambut juga dapat dipakai sebagai petunjuk umur dari pemiliknya. Pada orang-orang tua warna rambut akan berubah menjadi putih. Rambut lanugo pada bayi baru lahir mempunyai sifat halus, tidak berpigmen, tak bermedula dengan pola sisik yang lebih seragam.

b. Jenis kelamin

Melalui berbagai pemeriksaan yang teliti akan dapat ditentukan jenis kelamin dari pemilik rambut. Rambut laki-laki pada umumnya lebih kaku, lebih kasar dan lebih gelap. Sedang rambut wanita umumnya halus, panjang dan meruncing ke arah ujung.

Dari distribusinya juga dapat ditentukan jenis kelaminnya. Rambut jenggot, rambut dada dan kumis adalah khas rambut laki-laki. Penyebaran rambut pubis antara laki-laki dan wanita juga menunjukkan gambaran yang berbeda.

c. Ras

Untuk menentukan jenis rasnya dapat dilihat dari warna, panjang, bentuk dan susunan rambut. Rambut orang Eropa misalnya, berwarna pirang, kecoklatan atau kemerahan.

1. Pemeriksaan Laboratorium Forensik Lain

1. Isi Lambung

Pemeriksaan sianida ⁽²⁾

a. Reaksi Schonbein-Pagenstecher (Reaksi Guajacol).

Masukkan 50 mg isi lambung/ jaringan ke dalam botol Erlenmeyer. Kertas saring (panjang 3-4 cm, lebar 1-2 cm) dicelupkan ke dalam larutan guajacol 10% dalam alkohol, keringkan. Lalu celupkan ke dalam larutan 0,1% CuSO4 dalam air dan kertas saring digantungkan di atas jaringan dalam botol. Bila isi lambung alkalis, tambahkan asam tartrat untuk mengasamkan, agar KCL mudah terurai. Botol tersebut dihangatkan. Bila hasil reaksi positif, akan terbentuk warna biru-hijau pada kertas saring.

Reaksi ini tidak spesifik, hasil positif semu didapatkan bila isi lambung mengandung klorin, nitrogen oksida atau ozon; sehingga reaksi ini hanya untuk skrining.

b. Reaksi Prussian Blue (Biru Berlin).

Isi lambung/ jaringan didestilasi dengan destilator.

5 ml destilat + 1 ml NaOH 50 % + 3 tetes FeSO₄ 10% rp + 3 tetes FeCl₃ 5%,

Panaskan sampai hampir mendidih, lalu dinginkan dan tambahkan HCl pekat tetes demi tetes sampai terbentuk endapan Fe(OH)₃, teruskan sampai endapan larut kembali dan terbentuk biru berlin.

c. Cara Gettler Goldbaum.

Dengan menggunakan 2 buah flange (‘piringan’), dan diantara kedua flange dijepitkan kertas saring Whatman No. 50 yang digunting sebesar flange. Kertas saring dicelupkan ke dalam larutan FeSO₄ 10% rp selama 5 menit, keringkan lalu celupkan ke dalam larutan NaOH 20% selama beberapa detik. Letakkan dan jepitkan kertas saring di antara kedua flange. Panaskan bahan dan salurkan uap yang terbentuk hingga melewati kertas saring ber-reagensia antara kedua flange. Hasil positif bila terjadi perubahan warna pada kertas saring, menjadi biru.

d. Kristalografi

Bahan yang dicurigai berupa sisa makanan/ minuman, muntahan, isi lambung di masukkan ke dalam gelas beker, dipanaskan dalam pemanas air sampai kering, kemudian dilarutkan dalam aceton dan disaring dengan kertas saring. Filtrat yang didapat, diteteskan dalam gelas arloji dan dipanaskan sampai kering, kemudian dilihat di bawah mikroskop. Bila terbentuk kristal-kristal seperti sapu, ini adalah golongan hidrokarbon terklorinasi.

Pemeriksaan kualitatif dapat menggunakan penentuan titik cair, misal veronal murni mencair pada suhu 191° C. Uji kristal dilakukan terhadap sisa obat yang ditemukan dalam isi lambung. Masing-masing barbiturat mempunyai kristal yang khas bila dilihat dengan mikroskop. Metoda Kopanyi (reaksi warna kobalt) dengan modifikasinya.

e. Metoda Kopanyi

Dilakukan dengan memasukkan 50 ml urin atau isi lambung dalam sebuah corong. Periksa dengan kertas lakmus, jika bersifat alkali tambahkan HCl sampai bersifat asam. Tambahkan 100 ml eter, kocok selama beberapa menit. Diamkan sebentar, tampak air terpisah dari eter, lapisan air dibuang, barbiturat terdapat dalam lapisan eter. Saring eter ke dalam beaker glass dan uapkan sampai kering di atas penangas air. Tambahkan 10 tetes kloroform untuk melarutkan sisa barbiturat yang mengering.

Ambil beberapa tetes larutan dan letakkan pada white pocelain spot plate. Tambahkan 1 tetes kobalt asetat (1 % dalam metil alkohol absolut) dan 2 tetes isopropilamin (5% dalam metil-alkohol absolut), Barbiturat akan memberi warna merah muda sampai ungu.

Pemeriksaan kuantitatif dan kuantitatif dapat dilakukan dengan kromatografi lapis tipis (TLC), kromatografi gas cair (GLC), spektrofotometri ultra-violet dan spektrofotofluorimetri.

2. Organ⁽²⁾

1) Mata

Uji Nalorfin

Untuk mendeteksi seseorang apakah ia pecandu atau bukan, dapat diketahui melalui Uji Nalorfin. Pemberian Nalorfin pada pecandu morfin akan memperlihatkan midriasis dan gejala putus obat lainnya. Tetapi bila midriasis tidak terjadi, maka belum tentu ia bukan pecandu.

Caranya :

Ukur diameter pupil dengan pupilometer dan lakukan pemeriksaan ini di dalam ruang khusus yang tidak dipengaruhi cahaya. Pemeriksaan dilakukan lagi 30 menit setelah diberikan 3 mg Nalorfin subkutan.

2) Paru – paru

a) Pemeriksaan makroskopik paru.

Paru-paru mungkin masih tersembunyi di belakang kandung jantung atau telah mengisi rongga dada. Osborn (1953) menemukan pada 75% kasus, ternyata paru-paru sudah mengisi rongga dada, baik pada bayi yang lahir hidup maupun lahir mati. Paru-paru berwarna kelabu ungu merata seperti hati, konsistensi padat, tidak teraba derik udara dan pleura yang longgar (slack pleura). Berat paru kira-kira 1/70x berat badan.

Uji apung paru.

Uji ini harus dilakukan dengan teknik tanpa sentuh (no touch technique), paru-paru tidak disentuh untuk menghindari untuk timbulnya artefak pada sediaan histopotologi jaringan paru akibat manipulasi berlebihan. Setelah organ leaher dan dada dikeluarkan dari tubuh, lalu dimasukkan kedalam air dan dilihat apakah mengapung atau tenggelam. Kemudian paru kiri dan kanan dilepaskan dan dimasukkan kedalam air lagi, dan dilihat apakah mengapung atau tenggelam. Setelah itu setiap lobus dipisahkan dan di masukkan ke dalam air dan dilihat apakah mengapung atau tenggelam. 5 potong kecil dari bagian perifer tiap lobus dimasukkan ke dalam air, dan diperhatikan apakah mengapung ataukah tenggelam.

Hingga tahap ini, paru bayi yang baru lahir mati masih dapat mengapung oleh karena kemungkinan adanya gas pembusukan. Bila potongan kecil itu mengapung, letakkan di antara dua karton dan ditekan (dengan arah tekanan tegak lurus, jangan bergeser) untuk mengeluarkan gas pembusukan yang terdapat pada jaringan interstisial paru, lalu masukkan kembali ke dalam air dan di amati apakah masih mengapung atau tenggelam. Bila masih mengapung berarti paru tersebut berisi udara residu yang tidak akan keluar. Kadang-kadang dengan penekanan, dinding alveoli pada bayi yang telah membusuk akan pecah dan udara residu keluar dan memperlihatkan hasil uji apung paru negatif.

Uji apung paru harus dilakukan menyeluruh sampai potongan kecil-kecil, mengingat kemungkinan adanya pernafasan sebagian yang dapat bersifat buatan (pernafasan buatan) ataupun alamiah, yaitu bayi yang sudah bernafas walaupun kepala masih dalam vagina.

Hasil negatif belum berarti pasti lahir mati, karena adanya kemungkinan bayi dilahirkan hidup tapi kemudian berhenti bernafas meskipun jantung masih berdenyut, sehingga udara dalam alveoli diresopsi. Pada hasil negatif ini, pemeriksaan histopatologi harus dilakukan untuk memastikan bayi lahir mati atau hidup. Hasil uji apung paru positif berarti pasti lahir hidup.

Penyebab kematian. Penyebab kematian tersering pada pembunuhan anak sendiri adalah mati lemas (asfiksia). Cara tersering dilakukan adalah dengan cara pembekapan, penyumbatan jalan nafas, penjeratan, pencekikan dan penenggelaman. Kadang-kadang bayi dimasukkan ke dalam lemari, kopor dan sebagainya. ⁽²⁾

Lahir hidup dapat diketahui dari perangi paru-paru secara makroskopis maupun mikroskopis. Secara makroskopis paru-paru anak ayang dilahirkan hidup akan tampak mengembang dan menutupi kandung jantung, tepintnya tumpul, warnaya merah ungu dengan gambaran mozaik, lebih berat (1/35 berat badan, pada yang lahir mati atau belum bernafas berat paru-paru sekitar1/70 berat badan), pada perabaan teraba derik udara atau krepitasi, bila dimasukkan ke dalam air akan mengapung, bila diiris dan dipijat akan banyak mengeluarkan darah dan busa. Sedangkan secara mikroskopik akan tamak jelas adanya pengembangan dari kantung-kantung hawa (alveoli). ⁽⁷⁾

b) Mikroskopik paru-paru.

Setelah paru-paru dikeluarkan dengan teknik tanpa sentuh, dilakukan fiksasi dengan larutan formalin 10%. Sesudah 12 jam, dibuat irisan-irisan melintang untuk memungkinkan cairan fiksatif meresap dengan baik ke dalam paru. Setelah difiksasi selama 48 jam, kemudian dibuat sediaan histopatologi. Biasanya dibuat pewarnaan HE dan bila paru telah membusuk digunakan pewarnaan Gomori atau Ladewig.

Tanda khas untuk paru bayi belum pernah bernafas adalah adanya tonjolan (projection), yang berbentuk seperti bantal (cushion-like) yang kemudian akan bertambah tinggi dengan dasar menipis sehingga tampak seperti gada (club-like). Pada permukaan ujung bebas projection tampak kapiler yang berisi banyak darah.

Tanda khas untuk paru bayi yang belum bernafas yang sudah membusuk, dengan pewarnaan Gomori atau Ladewig, tampak serabut-serabut retikuler pada permukaan dinding alveoli berkelok-kelok seperti rambut keriting, sedangkan pada projection berjalan dibawah kapiler sejajar dengan permukaan projection dan membentuk gelung-gelung terbuka (open loops). Pada paru bayi baru lahir mati mungkin juga ditemukan tanda inhalasi cairan amnion yang luas karena asfiksi intrauterin.

Lahir hidup adalah keluar atau dikeluarkannya hasil konsepsi yang lengkap, yang setelah pemisahan bernafas atau menunjukkan tanda kehidupan lain, tanpa mempersoalkan usia gestasi, sudah atau belum tali pusat dipotong dan uri dilahirkan.

Pada pemeriksaan ditemukan dada sudah mengembang dan diafragma sudah turun sampai selaiga 4-5, terutama pada bayi yang telah lama hidup.

pemeriksaan paru lainnya adalah : ⁽²⁾

a. Pemeriksaan diatom :

Alga (ganggang) bersel satu dengan dinding terdiri dari silikat (SiO2) yang tahan panas dan asam kuat. Diatom ini dapat dijumpai dalam air tawar, air laut, sungai, air sumur dan udara.

Bila seseorang mati karena tenggelam, maka cairan bersama diatom akan masuk ke dalam saluran pernapasan atau pencernaan, kemudian diatom akan masuk ke dalam aliran darah melalui kerusakan dinding kapiler pada waktu korban masih hidup dan tersebar ke seluruh jaringan.

Pemeriksaan diatom dilakukan pada jaringan paru segar. Bila mayat telah membusuk, pemeriksaan diatom dilakukan dari jaringan ginjal, otot skelet atau sumsum tulang paha. Pemeriksaan diatom pada hati dan limpa kurang bermakna sebab berasal dari penyerapan abnormal dari saluran pencernaan terhadap air minum atau makanan.

b. Pemeriksaan Destruksi (Digesti Asam) Pada Paru

Ambil jaringan paru sebanyak 100 gram, masukkan ke dalam labu Kjeldahl dan tambahkan asam sulfat pekat sampai jaringan paru terendam, diamkan kurang lebih setengah hari agar jaringan hancur. Kemudian dipanaskan dalam lemari asam sambil diteteskan asam nitrat pekat samapi terbentuk dan cairan dipusing dalam centrifuge.

Sediment yang terjadi ditambah dengan akuades, pusing kembali dan hasilnya dilihat dengan mikroskop. Pemeriksaan diatom positif bila pada jaringan paru ditemukan diatom cukup banyak, 4-5/LPB atau 10-20 per satu sediaan; atau pada sumsum tulang cukup ditemukan hanya satu.

c. Pemeriksaan Getah Paru

Permukaan paru disiram dengan air bersih, iris bagian perifer, ambil sedikit cairan perasan dari jaringan perifer paru, taruh pada kaca objek, tutup dengan kaca penutup dan lihat dengan mikroskop.

Selain diatom dapat pula terlihat ganggang atau tumbuhan jenis lainnya

d. Pemeriksaan Kimia Darah

Pemeriksaan ini bertujuan untuk mengetahui kadar NaCl dalam darah sehingga dapat diketahui apakah korban meninggal di air tawar atau air asin. Darah yang diambil adalah darah dari jantung jenazah. Pada peristiwa tenggelam di air tawar ditemukan tanda-tanda asfiksia, kadar NaCl jantung kanan lebih tinggi dari jantung kiri dan adanya buih serta benda-benda air pada paru-paru. Tenggelam jenis ini disebut tenggelam tipe II A. Sedangkan pada peristiwa tenggelam di air asin terjadi gangguan elektrolit dan ditemukan adanya tanda-tanda asfiksia, kadar NaCl pada jantung kiri lebih tinggi dari pada jantung kanan dan ditemukan buih serta benda-benda air pada paru-paru. Tenggelam jenis ini disebut tenggelam tipe II B ⁽⁶⁾

3. Lain-Lain ⁽²⁾

1) Pada kasus keracunan As, kadar dalam darah, urin, rambut dan kuku meningkat.

Nilai batas normal kadar As adalah sebagai berikut :

Rambut kepala normal : 0,5 mg/ kg BB

Curiga keracunan : 0,75 mg/ kg BB

Keracunan akut : 30 mg/ kg BB

Kuku normal : sampai 1 mg/ kg BB

Curiga keracunan : 1 mg/ kg BB

Keracunan akut : 80 mikrog/ kg BB

Dalam urin, Arsen dapat ditemukan dalam waktu 5 jam setelah diminum, dan dapat terus ditemukan hingga 10-12 hari. Pada keracunan kronik, Arsen tidak diekskresikan terus menerus (intermitten) tergantung pada intake. Titik-titik basofil pada eritrosit dan lekosit muda mungkin ditemukan pada darah tepi, menunjukkan beban sum-sum tulang yang meningkat. Uji Kopro-porfirin urin akan memberikan hasil positif. Kematian dapat terjadi sebagai akibat malnutrisi dan infeksi.

Uji Reinsch

Berdasarkan Hukum Deret Volta (sebagian deret Volta adalah : K Na Ca Mg Al Zn Fe Pb H Cu As Ag Hg Au), unsur yang letaknya di sebelah kanan akan mengendap bila ada unsur yang letaknya lebih kiri dalam larutan tersebut. Letak As dalam deret adalah lebih kanan daripada Cu.

Cara pemeriksaan :

10 cc darah + 10 cc HCl pekat dipanaskan hingga terbentuk AsCl3. Celupkan batang tembaga ke dalam larutan, akan terbentuk endapan kelabu sampai hitam dari As pada permukaan batang tembaga tersebut. Untuk membedakan dari Ba, digunakan sifat sublimasi As.

2) Pemeriksaan laboratorium untuk mendeteksi adanya narkotika

Bahan terpenting yang harus diambil adalah urin (tidak dapat diambil ginjal), cairan empedu dan jaringan sekitar suntikan.

Isi lambung diambil jika ia menggunakan narkotika per-oral, demikian pula hapusan mukosa hidung pada cara sniffling. Semprit bekas pakai dan sisa obat yang ditemukan harus pula dikirim ke laboratorium.

Pada pemakain cara oral, morfin akan cepat dikonjugasi oleh asam glukoronat dalam sel mukosa usus halus dan hati sehingga bahan sebaiknya dihidrolisis terlebih dahulu.

Terhadap barang-barang bukti seperti bubuk yang diduga mengandung morfin, heroin atau narkotika lainnya, dapat dilakukan berbagai pengujian. Pengujian tersebut hanya dapat dilakukan terhadap benda bukti yang masih berupa preparat murni atau pada tempat suntikan bila ternyata di tempat tersebut masih terkumpul narkotika yang belum diserap dan tidak dapat dilakukan terhadap bahan biologis seperti urin, darah, cairan empedu dan lain-lain.

a. Uji Marquis :

Kepekaan uji ini adalah sebesar 1 – 0,025 mikro gram. Reagen dapat dibuat dari 3 ml asam sulfat pekat ditambah 2 tetes formaldehid 40 %. Pada umumnya semua narkotika akan memberikan reaksi warna ungu. (Morfin, heroin dan codei + Marquis  ungu; Pethidine + Marquis  jingga).

Untuk heroin, dapat dilakukan pengujian yang lebih khas :

10 tetes campuran asam nitrit pekat dan 85% asam fosfor yang memiliki perbandingan 12:38 diletakkan dalam tabung centrifuge ukuran 5 ml, kemudian ditambahkan 3,25 ml kloroform dan diputar selama 30 detik.

Perhatikan lapisan warna di dasar tabung yang timbul setelah 10 menit:

Hijau muda = negatif.

Kuning muda = 10 mikro gram.

Kuning coklat = 1 mg.

Merah coklat gelap = 10 mg.

b. Uji mikrokristal :

Uji ini lebih sensitif dan lebih khas jika dibandingkan dengan reaksi warna Amrquis.

Caranya :

1 tetes larutan narkotika ditambahkan reagen dan dengan mikroskop, dilihat kristal apa yang terbentuk.

Hanging microdrop technique merupakan modifikasi untuk narkotika dengan pembentukan kristal agak lama.

Contoh :

Morfin + reagen kalium kadmium yodida (1 gr kadmium yodida + 2 gr kalium yodida)  kristal berbentuk jarum.

Kepekaan uji : 0,01 mikrogram

Morfin + kalium triodida  kristal berbentuk pirirng.

Kepekaan uji : 0,1 mikrogram

Heroin + merkuri klorida  kristal berbentuk dendrit.

Kepekaan uji : 0,1 mikrogram

Heroin + platinum klorida  kristal berbentuk roset.

Kepekaan uji : 0,25 mikrogram

Pethidin + asam pikrat pekat  kristal berbentuk roset berbulu.

Kepekaan uji : 0,1 mikrogram

3) Untuk menentukan barbiturat dalam organ tubuh ⁽²⁾

Untuk pemeriksaan toksikologik, bahan yang harus dikirim ialah isi lambung, darah hati atau perifer, urin, ginjal, hati, sebagian otak dan lemak pada kasus keracunan barbiturat golongan kerja sangat singkat.

Ada 5 macam metode ekstraksi (Moghrabi & Curry), dan yang memberikan hasil terbaik ialah ekstraksi langsung dengan kloroform. Bila kadar dalam darah sangat rendah maka metode yang diapakai adalah metode asam tungstat.

Konsentrasi barbiturat dalam otak, hati dan ginjal menunjukkan jumlah yang besar sedangkan dalam otot dan tulang-tulang sedikit. Konsentrasi barbiturat yang terbesar terdapat dalam otak dan hati yang bervariasi antara 2,5-8 mg/100 gr jaringan.

Dalam keadaan mayat yang membusuk lanjut, barbiturat masih tetap dapat ditentukan (lebih kurang 25 % dari konsentrasi semula) sehingga dalam melakukan penarikan kesimpulan, hal ini perlu diperhitungkan.

4) Pemeriksaan pada senjata api

a. Uji difenhidramin ⁽²⁾

Uji difenhidramin, terhadap adanya nitrat dan pemeriksaan spektrofotometri terhadap Sb pada tangan tersangka pelepas tembakan, terutama pada senjata jenis revover merupakan salah satu cara pembuktian terhadap pelaku penembakan.

b. Uji Parafin ⁽⁶⁾

Uji tradisional yang amata terkenal adalah tes Paraffin (tes Gonzalez, yang menggunakan parafin), yang menggunakan parafin cair untuk mengambil residu dari tangan dan kemudian menambahkannya dengan diphenylamine.

Tes parafin tersebut sebetulnya tes yang tidak spesifik, sebab hanya mendeteksi adanya nitrate dan nitrite saja sehingga tes ini juga dapat memberikan hasil positif jika tangan tercemar tembakau, kacang-kacangan, pupuk, atau obat-obatan.

c. Tes Harrison & Gilroy ⁽⁶⁾

Menggunakan kasa yang telah dibasahi dengan asam chlorida. Bedanya dengan tes parafin adalah bahwa tes yang terakhir ini untuk mendeteksi adanya unsur logam mercury, antimony, barium atau timah hitam. Tentu harus diperhitungkan apakah pekerjaannya berkaitan dengan logam-logam tersebut.

BAB III

IMPLEMENTASI PEMERIKSAAN LABORATORIUM FORENSIK SEDERHANA PADA KASUS TERTENTU

Kasus Infantisida

Kasus Tenggelam

Keracunan CO

Keracunan Insektisida

Luka Tembak

Kasus Perkosaan

BAB IV

KESIMPULAN

Pemeriksaan laboratorium forensic sederhana merupakan pemeriksaan yang tanpa disadari dibutuhkan keberadaannya untuk membantu memperjelas suatu kejadian dalam melakukan visum.

Pemeriksaan laboratorium forensic sederhana yaitu pemeriksaan laboratorium yang dalam pengerjaannya mudah, dengan alat dan reagen yang murah dan mudah didapat namun memberikan nilai manfaat yang besar.

Macam-macam pemeriksaan laboratorium forensik sederhana :

1. Pemeriksan laboratorium forensik darah

Tahapan pemeriksaan bila ditemukan bercak merah

1. Persiapan
2. Tes penyaring (apakah bercak tersebut benar darah?)

Test yang paling sering dilakukan pada pemeriksaan ini adalah Test Benzidine, Karena merupakan pemeriksaan yang paling baik yang telah lama dilakukan. Pemeriksaan ini sederhana, sangat sensitif dan cukup bermakna. Jika ternyata hasilnya negatif maka dianggap tidak perlu untuk melakukan pemeriksaan lainnya.

c.       Tes meyakinkan / konfirmasi

Gold Standarnya adalah test Teichman (Tes kristal haemin)

Hasil positif dinyatakan dengan tampaknya Kristal hemin HCL yang berbentuk batang berwarna coklat yang terlihat dengan mikroskopik.

Kesulitan yang ditemui yaitu Mengontrol panas dari sampel karena pemanasan yang terlalu panas atau terlalu dingin dapat menyebabkan kerusakan pada sampel.

d.      Pemeriksaan selanjutnya

i. Golongan darah & paternitas

Penentuan jenis antigen dapat dilakukan dengan cara absorpsi inhibisi, absorpsi elusi atau aglutinasi campuran. Cara yang biasa dilakukan adalah cara absorpsi elusi.

ii. Keracunan

    1. Pemeriksaan CO (karbon monoksida)

Untuk penentuan COHb secara kualitatif dapat dikerjakan uji difusi alkali.

    2. Pemeriksaan Alkohol

Salah satu cara penentuan semikuantitatif kadar alkohol dalam darah atau urin yang cukup sederhana adalah teknik modifikasi mikrodifusi (Conway)

   3. Pemeriksaan Insektisida

      Penentuan kadar AchE dalam darah dan plasma dapat dilakukan     dengan cara tintimeter (Edson) dan cara paper-strip (Acholest).

4. Pemeriksaan Sianida

Uji kertas saring.

Kertas saring dicelupkan ke dalam larutan asam pikrat jenuh, bila positif maka warna akan berubah menjadi merah terang karena terbentuk sianmethemoglobin.

2. Pemeriksaan laboratorium forensik cairan mani

a.  Pemeriksaan spermatozoa (mikroskopis)

Dapat dilakukan baik dengan pewarnaan maupun tanpa pewarnaan. Pemeriksaan motilitas spermatozoa tanpa pewarnaan paling bermakna untuk memperkirakan saat terjadinya persetubuhan. Sedangkan bila dilakukan dengan pewarnaan, dianjurkan menggunakan pewarnaan malachite green karena mudah dan baik untuk kepentingan forensik. namun perlu diingat bahwa pemeriksaan ini tidak spesifik

b. Penentuan cairan mani (kimiawi)

Pertama-tama dilakukan tes penyaring akan adanya bercak mani dengan reaksi fosfaatase asam. Namun perlu diingat bahwa pemeriksaan ini tidak spesifik. Bila hasil negatif (tidak ditemukan spermatozoa) bisa dilakukan tes ulang dengan reaksi flourence.

Pada golongan sekretor dari cairan semen dapat ditentukan golongan darahnya denga cara absorpsi inhibisi.

Pemeriksaan bercak mani pada pakaian, pertama kali dilakukan pemeriksaan dibawah sinar UV, dimana bercak semen menunjukkan flouresensi putih.

Pemeriksaan pria tersangka pelaku pemerkosa dapat dilakukan pemeriksaan cara lugol, dengan catatan pelaku belum mencuci alat kelaminnya. Pada pemeriksaan ini didapatkan sel-sel epitel vagina dengan sitoplasma berwarna coklat karena mengandung banyak glikogen dari glans penis pelaku.

3. Pemeriksaan laboratorium forensik cairan tubuh lainnya

a. Air liur

Pemeriksaan golongan darah pada air liur

Dilakukan bila didapatkan jejas gigitan, dari air liur yang menempel dapat dilakukan pemeriksaan golongan darah cara absorpsi inhibisi dengan catatan golongan darah penggigit termasuk sekretor.

b. Urin

Pemeriksaan untuk timbal. untuk skrining massal dalam menentukan timbal dapat dilakukan cara fluoresensi dan uji koproporfirin III. Selain itu dapat juga dilakukan pemeriksaan alkohol dengan teknik modifikasi mikrodifusi (conway).

4.    Pemeriksaan laboratorium forensik rambut

Pada pemeriksaan rambut yang pertama diperiksa adalah keasliannya, kemudian diperiksa apakah rambut itu rambut manusia atau binatang. Selanjutnya dilihat identitas pemilik rambut serta informasi-informasi lain yang ada kaitannya dengan kejahatan. Langkah selanjutnya dilakukan identifikasi, mencakup umur, jenis kelamin, dan ras.

5.    Pemeriksaan laboratorium forensik lain-lain

Pada pemeriksaan laboratorium forensik juga mencakup pemeriksaan isi lambung (pemeriksaan sianida) terdiri dari Reaksi Schonbein-Pagenstecher (Reaksi Guajacol), Reaksi Prussian Blue (Biru Berlin), Cara Gettler Goldbaum, Kristalografi, Metoda Kopanyi, pemeriksaan organ mata mencakup pemeriksaan Uji Nalorfin; dan organ paru-paru terdiri dari pemeriksaan makroskopik paru (Uji apung paru) dan mikroskopik paru-paru. pemeriksaan paru lainnya adalah pemeriksaan diatom, Pemeriksaan Destruksi (Digesti Asam) dan Pemeriksaan Getah Paru

.

Pemeriksaan lainnya dicontohkan pada kasus keracunan As, kadar dalam darah, urin, rambut dan kuku yang meningkat. Uji Kopro-porfirin urin akan memberikan hasil positif. Kematian dapat terjadi sebagai akibat malnutrisi dan infeksi. Serta dilakukan pemeriksaan toksikologik yaitu Uji Reinsch, Uji Gutzeit yang memperlihatkan noda coklat sampai hitam pada kertas saring, Pada pemeriksaan laboratorium untuk mendeteksi adanya narkotika dilakukan uji Marquis dan uji mikrokristal.

Terdapat juga pemeriksaan untuk menentukan barbiturat dalam organ tubuh, sedangkan untuk pemeriksaan pada senjata api dapat dilakukan, uji dipenhidramin dan Tes Harrison & Gilroy sedangkan untuk uji parafin sudah jarang yang duganakan.

DAFTAR PUSTAKA

1. Spalding, Robert P. Identification and Characterization Blood and Bloodstain. In: James SH, Nordby JJ, Editors. Forensic Science An Introduction to Scientific and Investigative Techniques. Boca Raton: CRC Press LLC; 2000. p. 181-98
2. Budiyanto A, Widiatmo W, Sudiono S, Winardi T, Mun’im A Sidhi, Hertian S, et al. Ilmu Kedokteran Forensik. 1^st ed. Jakarta: Bagian Kedokteran Forensik Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia; 1997. p. 47: 68-69: 92-100: 105-06: 111: 113: 125-26: 136-37: 144-46: 167—96
3. Sheperd R. Simpson’s Forensic Medicine. 12^th ed. New York: Oxford University Press, Inc.; 2003. p. 58
4. Gonzales TA, Vance M, Helpern M, Umberger CJ. 2^nd ed. New York: Appleton-Century-Croft, Inc.; 1954. p624-36: 389
5. Mansjoer, Arif M. Kapita Selekta. 3 ^rd ed. Jakarta : Media Aesculapius; 2003. p.233-36
6. Dahlan S. Ilmu Kedokteran Forensik Pedoman Bagi Dokter dan Penegak Hukum. Semarang: Badan Penerbit Universitas Diponegoro; 2008. p. 172-76
7. Idries, A. M, Tjiptomartono, A. L. Penerapan Ilmu Kedokteran Forensik dalam Proses penyelidikan. Jakarta: Sagung seto; 2008. p. 174
8. Kubic TA, Petraco N. Microanalysis and Examination of Trace Evidence. In: James SH, Nordby JJ, Editors. Forensic Science An Introduction to Scientific and Investigative Techniques. Boca Raton: CRC Press LLC; 2000. p. 264-66
9. Greenfield, Andrew and Monica M Sloan. Identification of Biological Fluids and Stains. In: James SH, Nordby JJ, Editors. Forensic Science An Introduction to Scientific and Investigative Techniques. Boca Raton: CRC Press LLC; 2000. p. 203-20
10. http://hukumonline.com/detail.asp?.id=18467&c1=berita